降落PCR(Touch Down)编程能力

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降落PCR(touchdown PCR),是一种用于PCR的条件的优化的PCR技术。有很多情况下,我们设计的引物并不能让PCR顺利进行,例如特异性不够、以及易错配等。
 
退火温度过高会降低PCR效率,但退火温度过低则会产生过多非特异扩增。降落PCR技术提供了一个较为简易的优化方法。降落PCR的原理是首先编程让样本在较高的退火温度下扩增,此时虽然扩增效率低,但非特异扩增基本没有;在接下来的循环里,每个循环逐步降低退火温度,随着退火温度的降低,非特异扩增会逐步增多。但由于此时特异的扩增产物已经取得了一定的数量优势,所以会对非特异扩增产生强竞争抑制,从而大幅度提高PCR的特异性和扩增效率。降落PCR技术已经大量进入医疗临床应用。当下,以高通量PCR为基础的检测方法,如人的 HLA分型,大多采用这一技术。
 
设计PCR程序时,WEALTEC梯度PCR仪SEDI G可以在设置多循环反应程序时,设置相连循环的退火温度以何种方式“降落”。由于开始时的退火温度会选择高于预估的Tm值,随着循环的进行,退火温度逐渐降到Tm值,并最终低于这个温度,用于确保第一个引物玉模板杂交反应发生在最互补的反应物之间,也就是那些产生目的扩增产物的反应物之间。尽管退火温度最终会降到非特异杂交的Tm值,但此时我们需要的目的扩增产物也已开始几何扩增,在剩下的循环中处于远超任何非特异PCR产物的量级。